1.外泌体是什么？

外泌体(Exosome)是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的直径 30- 150nm 的纳米级磷脂双分子层包裹的结构，密度1.13- 1.21g/mL，内部包裹了蛋白质、核酸和脂质等。包括肿瘤细胞在内的几乎所有类型的细胞，都可以产生并释放外泌体。外泌体由细胞分泌释放出来，在血液等体液内传播，最后又可被其他细胞吞噬，是细胞间通讯的重要介质。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等。

2.外泌体和微囊泡有什么区别？

外泌体(30- 150nm)的直径比微囊泡(100- 1000nm)小，最主要是它们产生机制不同，外泌体主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体 外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，而微囊泡是细胞膜以出芽的方式，释放到 胞外的膜性囊泡，也含有蛋白质、脂类和核酸等分子。

3.外泌体的研究方向有哪些？

1) 揭示疾病发病机制，揭示细胞之间通讯促进疾病发生的原因：主要研究外泌体作为细胞间的摆渡车，介导细胞间通讯和免疫方面起作用，属于微环境研究的范畴。

2) 寻找疾病诊断和预后的分子标志物：主要研究外泌体种类、数目、大小和内含物与疾病发生之间的关系，对外泌体中的蛋白、核酸进行定量，以作为疾病的 标志物，可预测疾病的发生和进展。

3) 作为药物载体，实现靶向给药：外泌体可作为载体将包裹在其内的药物运送到目标区域。

4.华盈生物可以提供哪些外泌体相关的技术服务？

华盈生物根据不同的样品类型和研究目的，推出优选的外泌体分离方法，并提供全套的外泌体研究技术服务。在分离高质量外泌体的基础上，进行外泌体中的蛋白质和核酸组分的高通量筛选和分析。

5.现有的外泌体常用数据库有哪些？

1) ExoCarta 数据库。是一个关于外泌体蛋白、RNA、脂质体的手工数据库，也是 目前最常用的外泌体数据库。

2)人类血液外泌体长链 RNA 数据库。专门收录外泌体中各种长链RNA (mRNA， IncRNAk 及circRNA)的数据库

3) Vesiclepedia 数据库。不仅收录了外泌体中的分子信息，还有microparticles,Nanovesicles,Apoptoti bodies 等囊泡类型的信息，并且可以根据物种、囊泡、分子和样品类型浏览和检索。

4) EVmiRNA 数据库。可以查询特定组织细胞来源细胞外囊泡的miRNA表达情况。

5) exoRBase 数据库(http://www.exorbase.org/)。循环RNA (CircRNA)、长非编码 RNA (LncRNA)和信使RNA (mRNA)的储存库。

6) EV-TRACK (http://www.evtrack.org/)

7) EVpedia (http://evpedia.info)

8) EMBL-EBI 外泌体数据库(http://www.ebi.ac.uk/GOA/exosome)

9) Urinary Exosome Protein Database

10) 尿外泌体蛋白数据(https://hpcwebapps.cit.nih.gov/ESBL/Databsae/Exosome)

6.外泌体样品如何定量？

目前外泌体的定量方法主要有三种：

1)通过BCA等方法对分离得到的外泌体进行蛋白定量，用测得的蛋白量来反映 外泌体的量。

2)通过纳米粒子计数仪对外泌体的粒子数进行计算，使用粒子数目来反映外泌体 的数量。

3)使用外泌体表面特定的某一个标志物的ELISA定量数据来反映外泌体的数量， 比如使用CD63 、CD81等。

对于定量方法的选择，三者选一即可，论文前后保持一致即可。BCA 定量容易有杂蛋白影响、纳米粒子计数也存在一定的误差、ELISA 分析的外泌体蛋白通常在其他膜结构和游离系统中都会有。

7.可以分离不同大小的 EVs 吗？

文献里虽然通过两种离心力大小 16,500×g 和 118,000×g 的超速离心收集了两 组 EV 亚群，电镜观察到 16,500×g 离心的 EV 粒径为 100-300nm ，118,000×g 离 心的 EV 粒径为40- 100nm ，RNA 谱上也有一些差别。可是蛋白组学结果表明，虽然有一些特异性蛋白，但是大多数蛋白在两种离心力下分离到的 EV 中都是常见的。

文章中明确表示使用目前最新的分离方法，也不可能将每个EV 亚群完全彼此分离。 因此后续将两个囊泡合并在一起，进行进一步纯化， 然后进行蛋白质组学实验。( 2019_Mitochondrial protein enriched extracellular vesicles discovered in human melanoma tissues can be detected in patient plasma_JEV)

全自动外泌体提取系统(EXODUS)，基本原理为负压振荡系统(NPO)结合双耦合谐波振荡系统(HO)作用于纳米超滤芯片，将样本中的游离核酸与蛋白等杂质 通过芯片快速分离，从而纯化富集外泌体。结合不同孔径的纳米超滤芯片，可实现 对不同大小 EV 亚群的细分。